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Introdução

O citomegalovírus (CMV) é considerado o patógeno mais importante em pacientes transplantados, pois pode causar significativa morbidade e mortalidade. Os tratamentos anti-CMV provaram ser eficazes, mas não apresentam efeitos colaterais adversos. Assim, existe uma forte necessidade de testes sensíveis e confiáveis ​​para diagnosticar e monitorar a infecção ativa por CMV. Diversas metodologias de teste estão disponíveis nos laboratórios clínicos de hoje para avaliar o status do CMV de um paciente: cultura viral, sorologia, histopatologia, antigenemia pp65 e PCR quantitativa. Neste post, analisaremos as vantagens e limitações desses testes.

Cultura viral

A cultura viral é realizada mais comumente pelo ensaio de frasco de concha (também conhecido como cultura rápida), no qual uma linha celular (geralmente células de fibroblastos humanos) é inoculada com a amostra do paciente por centrifugação. O vírus é então detectado por anticorpo monoclonal fluorescente direto ou indireto, fornecendo resultados dentro de 1-3 dias. A etapa de centrifugação melhora bastante o tempo de resposta, quando comparado à técnica tradicional de cultura de células tubulares, que pode levar de duas a três semanas antes que um resultado seja considerado negativo.

A cultura de CMV foi amplamente substituída por metodologias mais recentes, como PCR quantitativo e antigenemia por CMV. Isso ocorre devido à sensibilidade relativamente mais fraca para diagnosticar a infecção por CMV em comparação com os testes mais recentes, bem como pelo tempo de resposta mais lento. Culturas virais de urina, secreções orais e fezes não são recomendadas devido à baixa especificidade; no entanto, para o diagnóstico de CMV congênito, a cultura viral de amostras de urina ou saliva é uma alternativa aceitável se a PCR não estiver disponível.

Sorologia

O sorostatus do CMV é uma métrica importante para avaliar antes de os pacientes receberem um transplante de órgão sólido ou hematopoiético. O teste sorológico é realizado principalmente por imunoensaios enzimáticos e ensaios indiretos de imunofluorescência. Esses testes verificam a presença de imunoglobulina anti-CMV (Ig) M e IgG para fornecer evidências de infecção recente ou passada. Fora do estabelecimento do sorostatus (principalmente em doadores e receptores de órgãos), o teste sorológico para CMV não é recomendado no diagnóstico ou monitoramento de infecção ativa por CMV.

Os anticorpos IgM CMV podem ser detectados nas duas primeiras semanas de desenvolvimento dos sintomas e podem estar presentes por mais 4-6 meses. Os anticorpos IgG podem ser detectados 2-3 semanas após o desenvolvimento dos sintomas e permanecem presentes por toda a vida. Essas medições de anticorpos são particularmente úteis na determinação do risco de aquisição de CMV em pacientes soronegativos (negativos para IgM e IgG) no momento do transplante. Os títulos de IgG também podem ser medidos a cada 2-4 semanas para avaliar a reativação do CMV em pacientes soropositivos. Como o CMV IgG permanece persistentemente em circulação, o teste para ele tem uma especificidade mais alta em comparação com o IgM e, portanto, é a imunoglobulina preferida para testar no estabelecimento do status sorológico. Os testes sorológicos podem ser falsamente positivos se os pacientes receberam recentemente IVIG ou produtos sangüíneos; portanto, os testes em amostras de pré-transfusão são preferíveis, se possível.

Histopatologia

Sob o microscópio, as células infectadas com CMV podem expressar certos efeitos citopáticos virais. Essas células infectadas apresentam classicamente inclusões citoplasmáticas e nucleares (núcleos oculares de coruja) com aumento citoplasmático e nuclear. Além disso, a imuno-histoquímica (IHC) pode corar anticorpos especificamente para proteínas do CMV para destacar células infectadas, tornando o exame histológico mais rápido e melhorando a sensibilidade do diagnóstico.

A histopatologia pode ser útil na identificação de doenças invasivas dos tecidos, como colite por CMV ou pneumonite. Casos em que o teste de PCR é negativo não exclui necessariamente doença invasora de tecidos; assim, o diagnóstico de doença invasiva do tecido depende de exame histológico (com ou sem IHC) ou possivelmente de cultura viral. Por outro lado, um resultado histológico negativo não exclui a doença invasiva do tecido, possivelmente devido à amostragem inadequada, e mostra o potencial de fraca sensibilidade diagnóstica.

antigenemia pp65

O teste de antigenemia por CMV utiliza imunofluorescência indireta para identificar o antígeno pp65, uma proteína da matriz específica do CMV, nos leucócitos polimorfonucleares do sangue periférico. Amostras de sangue total são lisadas e, em seguida, os leucócitos são citocentrifugados em uma lâmina de vidro. Anticorpos monoclonais para pp65 são aplicados, seguidos por um anticorpo secundário marcado com FITC. A lâmina é então lida usando um microscópio de fluorescência para a coloração nuclear homogênea de polilobato verde-amarelo, indicando a presença de leucócitos positivos para o antígeno do CMV. Estudos sugeriram que um número maior de células positivas se correlaciona com um risco aumentado de desenvolver doença ativa. A sensibilidade dos testes de antigenemia é superior à da cultura viral e oferece um tempo de resposta em várias horas.

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Este teste é utilizado desde a década de 1980, mas tem sido menos utilizado recentemente devido à crescente popularidade da PCR quantitativa. O teste de antigenemia é trabalhoso e requer pessoal experiente e treinado para interpretar os resultados (o que pode ser um pouco subjetivo). Este teste também deve ser realizado em amostras de sangue total dentro de 6-8 horas após a coleta devido à diminuição da sensibilidade ao longo do tempo, o que limita a transportabilidade das amostras. Além disso, não é recomendável administrar pacientes com contagem absoluta de neutrófilos abaixo de 1000 / mm3, devido à diminuição da sensibilidade. Apesar dessas limitações, o teste de antigenemia por CMV ainda é considerado uma opção viável para diagnosticar e monitorar a infecção por CMV, especialmente quando o teste de carga viral não está disponível.

PCR quantitativo

A reação quantitativa em cadeia da polimerase em equipe real (PCR) é o método mais comumente usado para monitorar pacientes em risco de doença por CMV e resposta à terapia, bem como para diagnosticar infecção ativa por CMV. As vantagens do uso de um ensaio quantitativo de PCR incluem aumento da sensibilidade em relação aos testes de antigenemia, tempo de resposta rápido, flexibilidade do uso de amostras de sangue total ou plasma por até 3-4 dias à temperatura ambiente e a disponibilidade de um padrão de referência internacional publicado pelo World Organização de Saúde (OMS).

Vários ensaios da Roche, Abbott e Qiagen estão disponíveis e são aprovados pela FDA. Os alvos desses ensaios variam, com alguns polimerase alvo e outro gene precoce imediato importante do CMV. Todos esses ensaios são calibrados com o padrão internacional da OMS, desenvolvido em 2010 para ajudar a padronizar os valores da carga viral entre diferentes laboratórios quando os resultados são relatados em unidades internacionais / mL. O objetivo deste padrão internacional é diminuir a variabilidade interlaboratorial da carga viral e determinar os pontos de corte apropriados para determinar a doença clínica por CMV. Ainda há melhorias a serem feitas nessa área, pois ainda existe variabilidade entre os laboratórios.

Conclusão

Existem vários testes para determinar o status do CMV dos pacientes. Alguns desses testes são adequados para objetivos específicos, como sorologia para determinar o status sorológico antes do transplante de órgão ou histologia e IHC para diagnosticar a doença por CMV específica de tecido. Para o diagnóstico e monitoramento da doença geral por CMV, o teste de escolha na maioria dos laboratórios é a PCR quantitativa, que oferece resultados automatizados, rápidos e sensíveis. A antigenemia, embora datada e trabalhosa, ainda é uma alternativa aceitável quando a PCR não está disponível nem é rentável para laboratórios menores. Ambos os métodos de teste são preferidos à cultura viral, que apresenta menor sensibilidade diagnóstica e tempo de resposta relativamente mais longo.

Apesar das inúmeras vantagens da PCR quantitativa, ainda existe variabilidade nas contagens de carga viral entre os laboratórios. Isso se deve a técnicas variadas de extração de DNA, alvos genéticos usados ​​pela PCR e tipos de amostras utilizados. Ainda há muito trabalho a ser feito na padronização de testes não apenas no CMV, mas também em outros patógenos virais, como o vírus Epstein-Barr, o vírus BK, o adenovírus e o HHV6. Os padrões atualizados e o aumento do uso de ensaios padronizados diminuirão, esperançosamente, essa variabilidade entre laboratórios para melhorar os resultados dos testes e, por sua vez, melhorar o atendimento ao paciente.

Referências

  1. https://www.uptodate.com/contents/overview-of-diagnostic-tests-for-cytomegalovirus-infection#H104411749
  2. https://www.uptodate.com/contents/congenital-cytomegalovirus-infection-clinical-features-and-diagnosis?topicRef=8305&source=related_link#H9542666
  3. Kotton CN, Kumar D, Caliendo AM, et al. Diretrizes de consenso internacional atualizadas sobre o manejo do citomegalovírus no transplante de órgãos sólidos. Transplantação. 2013; 96 (4): 333-60.
  4. Hayden RT, Sun Y, Tang L, et al. Progresso no teste quantitativo de carga viral: variabilidade e impacto das normas internacionais quantitativas da OMS. J Clin Microbiol. 2017; 55 (2): 423-430.
  5. Kotton CN, Kumar D, Caliendo AM, et al. As Terceiras Diretrizes de Consenso Internacional sobre o Manejo de Citomegalovírus no Transplante de Órgãos Sólidos. Transplantação. 2018; 102 (6): 900-931.

-David Joseph, MD, é um patologista clínico e anatômico do 2º ano residente no Houston Methodist Hospital, em Houston, TX. Ele planeja buscar uma bolsa de estudos em patologia forense após concluir a residência. Seus interesses fora do trabalho incluem fotografia, tocar baixo e videogame, fazer (e comer) sorvete caseiro e ciclismo.

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