cupom com desconto - o melhor site de cupom de desconto cupomcomdesconto.com.br

[ad_1]

Este mês, continuaremos discutindo as barreiras comuns aos testes de biomarcadores para pacientes com câncer na comunidade.

Como você deve se lembrar, estas são as 10 principais barreiras que eu já vi nos testes de biomarcadores na comunidade:

  1. Alto custo de teste.
  2. Tempo de resposta longo para obter resultados.
  3. Quantidade limitada de tecido.
  4. Questões pré-analíticas com o tecido.
  5. Baixas taxas de teste de biomarcadores.
  6. Falta de padronização nos testes de biomarcadores.
  7. Disciplinas isoladas.
  8. Baixo reembolso.
  9. Relatórios complexos e longos.
  10. Falta de educação sobre as diretrizes.

Como mencionei no mês passado, a quantidade e a qualidade da amostra são importantes ao considerar o teste de biomarcadores. Cobrimos a questão da quantidade de tecidos no mês passado; vamos para os problemas de qualidade dos tecidos. Vou me concentrar no que acontece com o tecido antes da realização do teste, chamada de fase pré-analítica do teste. Sabemos agora que variáveis ​​pré-analíticas podem alterar a estrutura da proteína, DNA e RNA (1). Isso pode alterar os resultados usados ​​para diagnosticar e tratar pacientes. Apesar do impacto nos ensaios a jusante, esta área é tipicamente mal controlada. Algumas das fontes de variação devido a processos pré-analíticos incluem aquisição, fixação, processamento e armazenamento de amostras (1).

Compras:

ROSA: Cobri a avaliação rápida no local (ROSE) durante as compras no mês passado em relação à quantidade de tecido. Ter um patologista avaliando a qualidade e a suficiência dos tecidos durante a biópsia é inestimável. Para análises moleculares, áreas de necrose devem ser evitadas.

Fixação:

Hora de colocar a amostra em fixação (tempo isquêmico frio): O tecido começa a se degradar assim que é removido do corpo. A quantidade de tempo entre a remoção do tecido do corpo e sua fixação é chamada de tempo isquêmico frio. Esse tempo deve ser o mais curto possível. Recomenda-se menos de 1 hora para estudos moleculares na amostra (1). O tecido começa a degradar imediatamente e essa degradação pode afetar os resultados de testes de biomarcadores, como IHC e FISH (1). Vi casos em que a biópsia foi coletada, mas devido a um dia agitado na sala de cirurgia, ela não foi enviada à patologia imediatamente. Isso pode fazer com que o tecido fique tão degradado que o teste não possa ser realizado. Infelizmente, às vezes não sabemos se houve um problema de fixação até que o teste molecular falhe repetidamente. Essa é uma maneira cara de determinar que algo deu errado na fase pré-analítica.

Para biópsias pequenas, como biópsias com agulha central ou mesmo aspirados com agulha fina, uma maneira de diminuir o tempo para colocar o espécime em fixador é ter o fixador na suíte onde a biópsia é coletada para que seja fixada imediatamente. Isso não funciona para grandes pedaços de tecido que talvez precisem ser dissecados para uma penetração ideal da fixação. Para essas biópsias, é necessário diligência para levar a biópsia ao laboratório o mais rápido possível. A comunicação multidisciplinar ajudará a garantir que a transferência ocorra em tempo hábil. As amostras podem precisar ser dissecadas para uma penetração ideal da fixação. Outras amostras podem precisar ser descalcificadas antes da fixação.

Descalcificação: A maioria dos processos de descalcificação com ácido fórmico tem efeitos negativos a jusante nos testes moleculares. Temos uma taxa de sucesso de cerca de 50% da PCR capaz de amplificar o DNA após o decalque padrão devido à degradação. A solução para isso é usar a descalcificação baseada em EDTA; no entanto, isso pode aumentar drasticamente o tempo de fixação. Alguns novos decalques suaves estão no mercado que poderiam ser usados ​​sem aumentar o tempo de resposta.

Fixador adequado: Também precisamos garantir que as amostras sejam fixadas no fixador apropriado. O fixador mais comum e amplamente aceito é a formalina tamponada neutra a 10% (NBF). O rendimento de DNA e alguns testes de biomarcadores a jusante são impactados negativamente se for usada formalina sem buffer (1). A fixação do tecido em álcool como etanol a 70% pode ser ainda melhor que o NBF se o ensaio a jusante envolver extração de DNA; no entanto, a fixação de etanol pode impactar negativamente os ensaios IHC ou FISH (2).

Tempo em Fixative: Estudos mostram que a quantidade adequada de tempo que uma biópsia precisa ser fixadora é de cerca de 6-72 horas (1). A grande variedade de tempos é devida à variedade de tamanhos de amostra, é geralmente aceito que a formalina penetra no tecido na taxa de 1 mm / hora (3). Pode ser necessário dissecar o tecido para garantir uma fixação completa dentro de um prazo razoável. Se o tecido não for fixado adequadamente, ele se degradará. No entanto, muito tempo no fixador pode levar ao DNA degradado.

cupom com desconto - o melhor site de cupom de desconto cupomcomdesconto.com.br

Ensaios de biomarcadores a jusante, como FISH, PCR e ISH, podem ser afetados se o tempo fixador for superior a 72 horas (1). Pequenos sites comunitários que não têm alguém processando amostras no fim de semana podem precisar ajustar seus horários de biópsia às sextas-feiras para garantir que as amostras não fiquem fixadas por mais de 72 horas. Infelizmente, a menos que a amostra seja uma biópsia da mama, na qual a PAC exige que os tempos de fixação sejam documentados e controlados, os tempos de fixação raramente são documentados e controlados. Esta é uma área em que todos podemos melhorar. Seria bom saber quanto tempo uma amostra foi armazenada quando estamos solucionando problemas de um ensaio a jusante.

Em processamento:

O impacto das variáveis ​​de processamento nos testes de biomarcadores não foi bem publicado. Uma variável que foi citada como tendo um efeito negativo na PCR é a mistura de cera de abelha com parafina. Apenas parafina pura deve ser usada. Outras mudanças nos cronogramas de processamento devem ser executadas com coordenação entre os departamentos. Se o laboratório de patologia anatômica fizer alterações em seu processo, um estudo de verificação do impacto nos ensaios a jusante deve ser realizado. A extensão desse estudo deve ser determinada pelo diretor médico.

Armazenamento de amostras:

Desde que a amostra tenha sido adequadamente fixada, o armazenamento em bloco de FFPE normalmente é bastante saudável. A literatura recomenda que os blocos utilizados para análises moleculares tenham menos de 10 anos (1). Embora eu não recomende o uso de blocos com mais de 10 anos, os casos positivos para alguns biomarcadores são raros; portanto, durante nossas validações, alguns blocos usados ​​tinham mais de 10 anos e os ensaios baseados em PCR a jusante ainda funcionavam. No entanto, não tenho como saber se o rendimento do DNA foi comprometido.

Diferentemente dos blocos de FFPE, o armazenamento de longo prazo dos slides de FFPE afeta os testes a jusante (4). O armazenamento em temperatura ambiente parece ser pior do que o armazenamento refrigerado de slides. As lâminas devem ser usadas para testes de IHC e biomarcadores de forma relativamente rápida (<30 dias).

Infelizmente, não posso cobrir completamente todas as fontes de erro pré-analítico em um post de 1.000 palavras, mas espero que isso desperte seu interesse o suficiente para conferir as referências nas quais os autores fornecem uma explicação mais detalhada dos problemas pré-analíticos.

Referências

  1. Baixo BP, Engel KB, Greytak SR, Moore HM. Uma revisão dos fatores pré-analíticos que afetam a análise molecular, proteica e morfológica do tecido fixado em formalina e incorporado em parafina (FFPE): quão bem você conhece sua amostra de FFPE? Arch Pathol Lab Med. 2014; 138: 1520-30.
  2. Lindeman NI, Cagle PT, Aisner DL, Arcila ME, Beasley MB, Bernicker EH, et al. Diretriz de Teste Molecular Atualizado para a Seleção de Pacientes com Câncer de Pulmão para Tratamento com Inibidores de Tirosina Quinase Direcionados: Diretrizes Do College of American Pathologists, da Associação Internacional para o Estudo do Câncer de Pulmão e da Association for Molecular Pathology. Arch Pathol Lab Med. 2018; 142: 321-46.
  3. Howat WJ, Wilson BA. Fixação tecidual e efeito de fixadores moleculares nos procedimentos de coloração a jusante. Métodos. 2014; 70: 12-9.
  4. Economou M, Schoni L, Hammer C, Galvan JA, Mueller DE, Zlobec I. O armazenamento adequado de lâminas de parafina é crucial para projetos de pesquisa translacional que envolvem manchas imuno-histoquímicas. Clin Transl Med. 2014; 3: 4.
Barreiras e soluções Parte 3 - Lablogatory 1

-Tabetha Sundin, PhD, HCLD (ABB), MB (ASCP)CM, Tem mais de 10 anos de experiência em laboratório em diagnóstico molecular molecular, incluindo oncologia, genética e doenças infecciosas. Ela é diretora científica de diagnóstico molecular e sorologia da Sentara Healthcare. Dr. Sundin é nomeado Professor Associado Adjunto da Old Dominion University e Professor Assistente da Eastern Virginia Medical School e está envolvido em numerosos esforços para apoiar o campo do diagnóstico molecular.

[ad_2]

Deixe uma resposta

O seu endereço de e-mail não será publicado. Campos obrigatórios são marcados com *